LLC-WRC-256细胞

二、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2) 离心管直接在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞后,根据离心后的沉淀量进行传代,转移至T25培养瓶中后,请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3) 悬浮细胞:传代时使用【半换液法】对细胞状态有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代,刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。

4) 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

三、细胞培养操作

1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含8mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

【半换液法】

悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。

【离心换液法】

如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a) 收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b) 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c) 将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、培养注意事项

1) 细胞出现问题,予以重发情况

a) 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;

b) 细胞污染问题,请在收到产品3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;

c) 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后,绝大多数细胞未存活,(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;

d) 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封,出现污染,重发;

e) 细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,和每天的细胞照片,核实后予重发;

f) 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照,3 天未告知的,视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤,并跟技术人员沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。 

2) 细