Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)-澳睿赛生物技术（上海）有限公司

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Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)

产品详请

Psi2 DAP (小鼠胚胎成纤维细胞) (种属鉴定正确)

一、细胞基本属性
细胞名称	Psi2 DAP小鼠胚胎成纤维细胞
细胞别称	Psi2-DAP; Psi-2-DAP; Psi-2 DAP
商品货号	ORC0270
种属来源	小鼠
年龄性别	胚胎
组织来源	正常胚胎
生长特性	贴壁生长
细胞形态	成纤维细胞样
背景简介	Psi2 DAP细胞生成一种可以感染小鼠细胞的载体。Psi2 DAP细胞生成的载体编码了人类胎盘碱性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因,Psi2 DAP细胞通过Psi2细胞插入一个重组的逆转录病毒(DAP)基因组衍生而来。被这种Psi2 DAP细胞产生的载体感染的细胞表达的磷酸酯酶可用组织化学方法检测,可以用作体内追踪它们命运的标记;Psi2 DAP细胞也可能产生辅助病毒。
生物安全等级	1
细胞规格	1×10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测	无
基因表达情况	a human placental alkaline phosphatase transducing vector
保藏机构	ATCC; CRL-1949
培养基	DMEM+10% FBS+1% P/S
培养条件	气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件	无血清冻存液,液氮储存
倍增时间

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

37度水浴摇晃尽快融化细胞,直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右,1min为宜,弃上清,沉淀用新鲜培养基重悬后接种到10cm培养皿,显微镜下观察细胞并拍照,24h后换液一次。

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1.尽量吸干净T25瓶原培养基;

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS;

3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层;

4.将培养瓶放入37度培养箱消化;

5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化;

6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清;

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;

8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养;。

3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代。

9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。