BV2 小鼠小胶质细胞(种属鉴定正确)
一、细胞基本属性
细胞名称 BV2小鼠小胶质细胞
细胞别称 BV2;小鼠小胶质细胞
商品货号 ORC0621
种属来源 小鼠
年龄性别 不详
组织来源 脑;胶质瘤
生长特性 半贴壁生长
细胞形态 多形型
背景简介 BV-2细胞是由E·Blasi建立于1990年;BV-2细胞由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病
毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。BV-2细胞保留有小神经胶质细胞多种形态、表
征和功能特征;免疫组化结果显示,BV-2细胞为MAC1、MAC2阳性;而MAC3、
胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。
细胞规格 1×10 6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测 无
培养基 DMEM-H+10%FBS+1%P/S
培养条件 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件 无血清冻存液,液氮储存
细胞接收后的处
理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损
、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2
-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在室温中放置1h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些
贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的
生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心
回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱
中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过
程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
细胞运输途中脱落操作方法:把脱落的细胞收集离心后弃上清,用PBS清洗一
遍,离心弃上清,在离心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右,加完全培养基终止
消化后离心重新铺平,剩下的贴壁细胞就按照正常贴壁细胞传代方法操作。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明
书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议
T25培养瓶1:2传代 。将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含8mL完全培
养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。
然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下
观察细胞生长情况和细胞密度。
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS
5 mL润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1mL,T75瓶2mL),置于
37℃培养箱中消化2分钟左右(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察
细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入5-6ml含
10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将
细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以
保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
贴壁细胞传代注意点:
1、 一定要PBS洗一遍。
2、 细胞多观察几次掌握时间,不要在细胞没有基本脱落就终止消化然后吹打下来,这样细胞
更容易分化和死亡。
3、 不要一直对细胞吹打。
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25
瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,
来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10 6~1×10 7个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用无血清细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×
10 6~1×10 7个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、
日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时
记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。三.细胞出现问题,予以重发情况:
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2. 细胞污染问题,请在收到产品3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
3. 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后,绝大多数细胞未存活,
(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封,出现污染,
重发;
5. 细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细
胞活力,和每天的细胞照片,核实后予重发;
6. 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照,3 天未告知的,视为产品合格。4-7 天内出现问题需
提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤,并跟技术人员
沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。
四、细胞出现问题,不予以重发的情况:
1. 客户操作造成细胞污染,不重发;
2. 客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发;
3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
4. 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片,不重发;
5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发;
6. 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的,不重发;
7. 视具体情况而定
注意事项:
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,
所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液
氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹
掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
