人关节滑膜成纤维细胞-澳睿赛生物技术（上海）有限公司

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人关节滑膜成纤维细胞

品牌：澳睿赛生物

产地：上海

型号：5×10?cells/T25细胞培养瓶

货号：ORCH360

价格： ￥8540/瓶
发布日期： 2024-08-22
更新日期： 2025-03-19

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产品详请

产地	上海
保存条件	详见说明
品牌	澳睿赛生物
货号	ORCH360
用途	仅供科研实验使用
组织来源	子宫组织
细胞形态	详见说明
是否是肿瘤细胞	否
保质期	详见说明
器官来源
免疫类型
品系
生长状态	详见说明
物种来源	人
包装规格	5×10?cells/T25细胞培养瓶
是否进口	否

人关节滑膜成纤维细胞

一、细胞基本属性
细胞名称	人关节滑膜成纤维细胞
组织来源	子宫组织
商品货号	ORCH360
种属来源	人
产品规格	5×10⁵cells/T25细胞培养瓶
细胞简介	滑膜是关节囊的内层,淡红色, 平滑闪光,薄而柔润,由疏松结缔组织组成。关节腔内的所有结构, 除关节软骨、半月软骨板以外,即便是通过关节腔的肌腱、韧带等均全部为滑膜所包裹。滑膜分泌滑液, 在关节活动中起重要作用。正常滑膜分为两层,即薄的细胞层(内腔层)和血管层(内膜下层),是血管丰富的关节囊内膜,贴附于非关节面部分,覆盖于关节囊内的骨面上, 不在软骨面上, 此部分称为边缘区或“裸区”。滑膜呈粉红色,光滑发亮、湿而润滑, 有时可见绒毛,内含胶原性纤维。滑膜细胞有A、 B两型。巨噬细胞样A型细胞, 表面有丝状伪足、浆膜内陷、囊泡、线粒体、溶酶体、胞浆纤维和高尔基体,具有吞噬功能; B型成纤维样滑膜细胞 (FLS) ,有高浓度的内质网结构, 是介导 RA 关节破坏的主要细胞。
培养基	原代成纤维细胞培养体系
换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	贴壁培养
细胞形态	成纤维样细胞
传代特性	细胞特性确定传代
消化液	0.25%胰蛋白酶
培养条件	气相: 空气,95%;CO2 ,5%

质量检测: 澳睿赛实验室分离的人关节滑膜成纤维细胞经纤维连接蛋白(Fibronectin) 或波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人关节滑膜成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核

备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考