人NK细胞-澳睿赛生物技术（上海）有限公司

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人NK细胞

品牌：澳睿赛生物

产地：上海

型号：5×10?cells/T25细胞培养瓶

货号：ORCH328

价格： ￥8250/瓶
发布日期： 2024-08-22
更新日期： 2025-03-17

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产品详请

产地	上海
保存条件	详见说明
品牌	澳睿赛生物
货号	ORCH328
用途	仅供科研实验使用
组织来源	外周血组织 ORCH328
细胞形态	详见说明
是否是肿瘤细胞	否
保质期	详见说明
器官来源
免疫类型
品系
生长状态	详见说明
物种来源	人
包装规格	5×10?cells/T25细胞培养瓶
是否进口	否

人NK细胞

一、细胞基本属性
细胞名称	人NK细胞
组织来源	外周血
商品货号	ORCR328
种属来源	人
产品规格	5×10⁵cells/T25细胞培养瓶
细胞简介	自然杀伤细胞(natural killer cell , NK)是机体重要的免疫细胞 ,不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关 ,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。一种稳定表达在NK和LAK细胞表面的LAK-1分子 , 120kDa , NK细胞在 IL-2条件下培养20天LAK-1仍为阳性 ,而HNK-1(CD57) 和CD16部分消失。 LAK 的杀伤活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。自然杀伤细胞刺激因子 (natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 对NK细胞有刺激作用。 IL-2、 IL-12、 IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(leukoregulin,LR) 对NK细胞的活化和分化有正调节作用 , 体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK的杀伤活性。前列腺素 (PG)E1、 E2、 D2和肾上腺皮质激素等对NK细胞的活性有抑制作用。
培养基	原代NK细胞培养体系
换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	悬浮培养
传代特性	根据细胞特性传代
消化液	0.25%胰蛋白酶
培养条件	气相:空气 ,95%; CO2 , 5%

质量检测: 澳睿赛实验室分离的人NK细胞经CD56或CD16免疫荧光染色为阳性 ,不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人NK细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核

备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考