大鼠食管成纤维细胞
| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 |
大鼠食管成纤维细胞 |
| 组织来源 |
肾脏组织 |
| 商品货号 |
ORCR460 |
| 种属来源 |
大鼠 |
| 产品规格 |
5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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细胞简介
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食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端 , 胸段位于左、右肺之间的纵膈内 ,胸段通过膈孔与腹腔内腹相连 ,腹段很短与胃 相连。 哺乳动物的食管结构上由内向外分四层:黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜 。其中 ,粘膜层与黏膜下层中的结缔组织是由成纤维细胞构成。 |
| 培养基 |
原代成纤维细胞培养体系 |
| 换液频率 |
每2-3天换液一次 |
| 生长特性 |
贴壁生长 |
| 细胞形态 |
不规则 ,长梭形细胞 |
| 传代特性 |
根据细胞特性 |
| 消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 |
气相:空气 ,95%; CO2 , 5% |
质量检测:澳睿赛实验室分离的大鼠食管成纤维细胞经纤维连接蛋白 ( Fibronectin) 或波形蛋白 (Vimentin) 免疫荧光染色为阳性 ,纯度可达90%以上 ,且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、 细菌、酵母和真菌等。
大鼠食管成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下 ,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中 , 用PBS清洗细胞培养瓶1 - 2次 ,收集清洗 液;
2) 1200 - 1500rpm离心3min , 弃上清 ,收集细胞沉淀;
3)加入5ml 新鲜完全培养基 , 用吸管轻轻吹打混匀 、 分散细胞; 将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中 , 置于37°C 、 5 % CO2 、 饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大 , 无法机械吹散时 , 向步骤2)中细胞沉淀添加0 . 25%胰蛋白酶消 化液2m L至离心管中 , 用吸 - 管轻轻吹打混匀 ,37°C温浴2 - 3 min , 消化结束后 , 加入胰酶抑 制剂(或血清)终止消化 , 用吸管轻轻吹打 , 分散细胞; 1200rpm离心5min , 弃上清 ,收集细胞沉淀;
5)加入5ml 新鲜完全培养基 , 用吸管轻轻吹打混匀; 按传代比例进行接种传代 ,然后补充 新鲜的完全培养基至5m L , 置于37°C 、 5 % CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后 ,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
