人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞-澳睿赛生物技术（上海）有限公司

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人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞

品牌：澳睿赛生物

产地：上海

型号：5×10?cells/T25细胞培养瓶

货号：ORCH375

价格： ￥8850/瓶
发布日期： 2024-08-22
更新日期： 2025-03-21

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产品详请

产地	上海
保存条件	详见说明
品牌	澳睿赛生物
货号	ORCH375
用途	仅供科研实验使用
组织来源	患类风湿性关节炎病人的关节滑膜组织
细胞形态	详见说明
是否是肿瘤细胞	否
保质期	详见说明
器官来源
免疫类型
品系
生长状态	详见说明
物种来源	人
包装规格	5×10?cells/T25细胞培养瓶
是否进口	否

人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞

一、细胞基本属性
细胞名称	人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞
组织来源	患类风湿性关节炎病人的关节滑膜组织
商品货号	ORCH375
种属来源	人
产品规格	5×10⁵cells/T25细胞培养瓶
细胞简介	滑膜是关节囊的内层,淡红色, 平滑闪光,薄而柔润,由疏松结缔组织组成。关节腔内的所有结构, 除关节软骨、半月软骨板以外,即便是通过关节腔的肌腱、韧带等均全部为滑膜所包裹。滑膜分泌滑液,在关节活动中起重要作用。正常滑膜分为两层, 即薄的细胞层(内腔层)和血管层(内膜下层),是血管丰富的关节囊内膜 ,贴附于非关节面部分, 覆盖于关节囊内的骨面上,不在软骨面上,此部分称为边缘区或“裸区”。滑膜呈粉红色, 光滑发亮、湿而润滑,有时可见绒毛, 内含胶原性纤维。滑膜细胞有A、 B两型。巨噬细胞样A型细胞,表面有丝状伪足、浆膜内陷、囊泡、线粒体、溶酶体、胞浆纤维和高尔基体, 具有吞噬功能; B型成纤维样滑膜细胞(FLS) ,有高浓度的内质网结构, 是介导 RA 关节破坏的主要细胞。
培养基	原代成纤维细胞培养体系
换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	贴壁培养
细胞形态	成纤维样细胞
传代特性	细胞特性确定传代
消化液	0.25%胰蛋白酶
培养条件	气相: 空气,95%;CO2 ,5%

质量检测: 澳睿赛实验室分离的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞经纤维连接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin) 免疫荧光染色为阳性,纯度可达90%以上, 且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核

备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考